细胞焦亡（Pyroptosis）是一种由炎症信号引发的程序性细胞死亡机制，其主要特征包括细胞膜的穿孔、细胞的肿胀与破裂。这一过程依赖于一类称为炎性半胱天冬酶的蛋白（主要有caspase-1、4、5和11），并伴随大量促炎因子的释放，如IL-1β和IL-18。与凋亡或坏死等其他细胞死亡形式相比，细胞焦亡在形态学特征、发生机制和调控方式上均有所不同。

为了便捷地检测细胞焦亡， 新葡萄8883官网AMG推出了BBcellProbe®细胞焦亡检测试剂盒。该试剂盒采用比色光度法来检测细胞焦亡相关蛋白酶Caspase的活性以及细胞质膜的完整性。该方法基于caspase-1/4/5催化相应的Caspase-14/5底物生成黄色的pNA，pNA在405 nm处有显著的吸收，进而通过测定吸光度来评估细胞焦亡相关蛋白酶的活性。同时，利用细胞膜非通透性荧光探针，可以检测细胞质膜的完整性。

BBcellProbe®试剂盒可通过酶标仪或荧光酶标仪进行检测，亦可使用容量不超过100 μl的分光光度计或荧光光度计进行分析，适用于细胞培养中的焦亡检测。此外， 新葡萄8883官网AMG 还提供荧光标记的焦亡检测试剂盒，如AFC、R110和AMC等，荧光法的灵敏度高于传统的分光光度法，因此在具备荧光检测条件时，推荐优先选择荧光法检测试剂盒。如果没有荧光检测条件，则可以选择 新葡萄8883官网AMG 的比色法细胞焦亡检测产品，需确保样品中的细胞焦亡程度已达到足够的水平。

检测方法

• 酶标仪/荧光酶标仪
• 分光光度计/荧光光度计
• 激光共聚焦显微镜
• 流式细胞仪

样本类型

• 细胞

实验步骤

1. 裂解缓冲液和检测缓冲液的配制。
2. 样品处理：
   1. 收集细胞，离心2-3分钟，小心吸取培养基并尽量吸干，收集细胞。
   2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽量吸干上清液。
   3. 在细胞中加入50 μl冷裂解缓冲液，高速涡旋振荡15秒。
   4. 置于冰上持续振荡25-40分钟。
   5. 在4℃下以10000×g离心10分钟。
   6. 将上清液转移至另一预冷的干净离心管中，置于冰上或-80℃保存备用。
3. 对处理后的上清液进行蛋白定量。
4. 进行焦亡检测。