新葡萄8883官网AMG提供了一种高效的3T3-L1脂肪细胞诱导分化方案，能够为研究脂肪细胞分化、代谢及相关代谢性疾病（如肥胖和糖尿病）的机制提供强有力的支持。3T3-L1细胞系最早于1974年由Green和Kehinde等人从小鼠胚胎成纤维细胞分离而成，因其能在体外有效分化为脂肪样细胞，因此被广泛应用于相关科学研究。

诱导分化的效果可以通过多种方法检测，其中油红O染色法是一种经典且直观的方式。油红O是一种脂溶性染料，专门用于与细胞内的中性脂质结合，并形成红色脂滴。在显微镜下观察脂滴数量和大小的增加可以表明诱导分化的成功。此外，通过检测脂肪细胞特异性基因（如PPARγ、aP2及LPL）的表达水平，也可评估细胞的分化程度，常用的技术包括Western Blot。

实验方案概述

第一阶段：细胞培养

1. 将细胞以每平方厘米3×10³的密度接种于六孔板中，注意均匀铺板，以确保分化效果。这一过程建议使用早代次的细胞，避免不均匀分化和细胞漂浮。

2. 用DMEM高糖培养基培养细胞，加入10%小牛血清或胎牛血清，待细胞汇合度达到约70%时更换培养基，并在37℃，5% CO₂的培养箱中继续培养至约90%的汇合度。切记，分化前汇合度不应超过70%，以减少细胞死亡的风险。

第二阶段：分化诱导培养基配制

1. 在无菌条件下，配置MDI诱导分化培养基和胰岛素培养基。此步骤需在培养箱内进行，确保所有操作均符合无菌要求。

2. 配置100 mL的MDI诱导分化培养基时，需要新鲜制备IBMX（50 mM）和地塞米松（1 mM）的储备溶液。胰岛素需根据制造商说明复溶，并加入DMEM中直到最终浓度达到10 µg/mL。

第三阶段：3T3-L1细胞向脂肪样细胞的分化

1. 从培养箱中取出细胞培养板，去除DMEM培养基，并在每孔加入2-3 mL的MDI诱导培养基，标记为第0天。加入诱导剂时，手法要轻柔，以避免冲击导致细胞漂浮。

2. 在第3天，去除MDI诱导培养基，并加入2-3 mL的胰岛素培养基替换；第6天更换为新鲜的DMEM培养基。一般在第7-10天可获得完全分化的脂肪样细胞。

3. 分化效果的检测可以通过油红O染色进行，以监测脂质的累积，或检测脂肪细胞特异性标志物（如脂联素和FABP4）的表达，进一步评估分化效果。

通过新葡萄8883官网AMG的方案，研究人员可以准确高效地研究脂肪细胞的分化过程，为未来的相关疾病研究奠定坚实的基础。