## 培养条件

细胞培养的条件至关重要，通常采用气相配置为95%空气和5%二氧化碳，温度保持在37℃，培养基为MEM，加入10% FBS和1% P/S。这样的环境能够为细胞生长提供理想条件。

### 传代方法

在细胞达到首次传代时，建议使用1:2的比例进行分瓶培育。如果细胞汇合度未超过80%，则应将培养液收集至离心管中，并保留5ml的完全培养基再次培养。

### 细胞处理

收到细胞后，使用75%酒精喷洒于细胞瓶外，进行消毒后，放入超净工作台内进行无菌操作。然后，将细胞瓶置于37℃和5% CO2的培养箱中稳定3-4小时，随后观察细胞生长情况并进行拍照记录（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据。

### 细胞培养步骤

细胞的传代流程如下：首先，弃去培养上清，使用无钙镁磷酸盐缓冲液（PBS）轻洗细胞1-2次。接着，加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞是否变圆并脱落，及时用完全培养基终止消化。随后，轻轻吹打细胞，并将悬液转移至离心管中，进行离心后重悬。

按1:2的比例将细胞悬液进行分瓶传代，并补充新的培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。根据实际细胞状态，传代比例可为1:2至1:5。

### 细胞冻存

当细胞生长覆盖整个培养瓶的80%时，弃去培养液后使用PBS清洗一次。添加0.25%胰蛋白酶，待细胞收缩后用完全培养基终止消化，再轻轻吹打细胞脱落。将细胞悬液转移至离心管进行离心后，加入无血清冻存液（雅吉生物，货号：C7001）混匀，并将其直接放入-80℃的冰箱中保存。

### 细胞复苏

取出细胞冻存管后，迅速置入37℃水浴中解冻，并用75%酒精消毒外壁。将解冻的细胞转移至含5ml完全培养基的离心管中，进行离心后重悬，接种至T25培养瓶，并放于37℃、5% CO2的培养箱中培养，第二天换用新鲜培养基继续培养。

### 注意事项

在运输过程中，细胞可能因粘附不牢而脱落，这是正常现象。推荐将培养液收集至离心管进行处理，以便于后续培养。对于新葡萄8883官网AMG品牌的细胞培养产品，确保遵循上述步骤，为细胞提供最佳的生长环境，有助于提高实验的成功率。