树突状细胞（DC细胞）和T细胞的相互作用在肿瘤治疗中占据着重要地位。研究显示，骨髓来源的DC细胞（BMDCs）能够诱导产生CD103+CD8+组织驻留记忆T细胞亚型，从而增强生殖道局部肿瘤的控制效果。此外，半乳糖酸的阻断进一步提升了BMDCs诱导抗原特异性CD8+T细胞增殖的能力。全转录组的基因表达分析表明，对BMDCs进行仿硅酸处理能够诱导与T细胞活化、细胞粘附及细胞间相互作用相关的基因发生差异表达。细胞聚类测定与单细胞嗜性测量的结果显示，糖基化减少的BMDC与CD8+T细胞之间形成了更强的嗜性相互作用。

在DC细胞完成抗原呈递后，其如何在CD8+T细胞的激活和靶细胞的杀伤过程中发挥协作和调控功能，成为当前的研究热点之一。此外，活化CD8+T细胞的记忆功能分群变化与其细胞内的乳酸化、棕榈酸化等代谢过程的关联，也是研究的关键主题。为了评估CD8+T细胞的杀伤功能，本期小E将提供DC细胞活化的CD8+T细胞培养与杀伤功能评估的解决方案。

实验原理简介

DC细胞被认为是已知的功能最强的抗原呈递细胞（APC），它们能够摄取消化外源抗原，并将其装载于MHC分子中，进而呈递给CD4+和CD8+T细胞以产生免疫反应。将DC细胞与CD8+T细胞共培养是模拟体内CD8+T细胞激活的最佳方法，因此成为CD8+T细胞相关研究中不可替代的模型制备方案。具体而言，当表达抗原肽-MHCⅠ复合物的DC细胞与CD8+T细胞共培养时，CD8+T细胞会通过其表面的T细胞受体（TCR）与DC细胞上的抗原肽-MHCⅠ复合物结合而被激活。活化后的CD8+T细胞（又称为细胞毒性T细胞）能够通过释放溶解介质（如穿孔素和颗粒酶）来杀伤靶细胞，此外，它们还可以通过T细胞表面的Fas配体（FasL/CD95L）与靶细胞的Fas受体（CD95）结合，触发Caspase-8的激活，从而直接启动靶细胞的凋亡程序。

实验结果展示

在DC细胞的体外培养与促成熟实验中，流式细胞术检测表明，经过促成熟培养后，C57小鼠骨髓细胞转化为成熟DC细胞，MHCII、CD80、CD40及CD86的表达均显著升高。同时，CD8+T细胞的分选按照EasySort™MouseCD8+TCellIsolationKit（货号:MIM003N）从C57小鼠脾脏中分选，流式细胞术分析表明细胞的纯度达标。使用灭活靶细胞（Raw2647）进行抗原装载后，分选的CD8+T细胞与之共培养72小时后，CD8+T细胞的增殖情况也得到了显著改善。

在CD8+T细胞杀伤靶细胞的凋亡检测中，增殖后的T细胞与靶细胞（Raw2647）按1:10的比例共培养24小时，流式细胞术分析靶细胞（Raw2647）中Caspase3酶活性的变化显示，相较于控制组，共培养组的Raw2647细胞Caspase3酶激活比例增加至7944%。ELISA检测上清中IFN-γ、IL-2、TNF-α等细胞因子的表达，结果表明，共培养组的细胞因子水平明显高于控制组。这些实验充分验证了DC细胞在CD8+T细胞活化及杀伤功能中的重要角色，表现出强大的生物医学研究价值。

实验方案及操作流程

DC细胞的体外培养与促成熟的操作流程为：取小鼠骨髓细胞，使用分化培养基培养6天后，换成成熟培养基培养24小时，以获得成熟的DC细胞。详细操作流程可参考“MouseBoneMarrow-derivedDendriticCells(BMDC)InductionandIdentificationKit”（货号：XJM003）说明书。进一步处理中，使用80℃水浴加热灭活Raw2647细胞4小时，并进行离心洗涤，重悬后进行计数。随后，将灭活处理的Raw2647细胞与成熟的BMDC以1:1的比例共培养24小时，收集细胞并计数，准备后续实验。

通过以上的实验方案，能够有效评估CD8+T细胞的杀伤功能，从而为肿瘤免疫治疗提供新的思路与方法，提升新葡萄8883官网AMG的科研实力，推动生物医学领域的发展。如需了解更多实验细节与技术支持，欢迎联系新葡萄8883官网AMG的技术团队！