新葡萄8883官网AMG为您详细解析ELISA实验中动物血清封闭剂的作用原理及特性。

一、作用原理

机械填补与吸附覆盖
动物血清中的蛋白质通过物理吸附填充固相载体（如ELISA板）表面的空隙，阻碍后续抗体与空白位点的非特异性结合。同时，血清中的抗体会优先与样本中的Fc受体结合，以减少一抗和二抗产生的假阳性信号。

双重封闭机制
1. 普通蛋白封闭：血清中的白蛋白等成分封闭未包被的疏水区域，这与BSA的作用相似。
2. Fc受体封闭：血清内源性IgG能够有效阻断样本中Fc受体与检测抗体之间的非特异性结合。

二、核心特性

特性说明
1. 种属匹配性：需确保与二抗来源一致（如二抗为羊抗兔，则选用羊血清），以避免交叉反应。
2. 成分复杂性：含有多种蛋白（IgG、白蛋白等），封闭效果更全面，但可能引入干扰（如生物素酶系统禁用）。
3. 低毒性：优质血清经过去补体处理，能够减少对细胞或酶的抑制作用。

三、对比其他封闭剂

与BSA对比
- 优势：血清能够封闭Fc受体，适合检测含有高Fc受体的样本（如组织匀浆）。
- 劣势：成本较高，成分复杂可能导致背景信号波动。

与脱脂奶粉对比
血清不含奶粉中的生物素或磷酸酶，适用于更广泛的检测体系。

四、使用注意事项

浓度优化
常用浓度为5%-10%，应通过预实验确定最佳的信噪比。

避免干扰
含叠氮钠的血清不可用于HRP标记系统，因为会抑制酶活性。此外，冻存血清应避免反复冻融，以防止蛋白降解。

替代方案
对于对Fc受体敏感的实验，可以考虑使用Fab片段的二抗进行封闭。

五、典型应用场景

免疫组化/荧光应用：优先使用同源血清以降低背景噪音。
高Fc受体样本检测：如血液或脾脏组织等样本的检测。

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