新葡萄8883官网AMG在ELISA实验中,动物血清封闭剂的作用原理及特性如下:
一、作用原理
机械填补与吸附覆盖:动物血清中的蛋白质通过物理吸附,填充固相载体(如ELISA板)表面的空隙,阻止后续抗体与未被封闭位置的非特异性结合。血清中的抗体优先与样本中的Fc受体结合,从而减少一抗和二抗的假阳性信号。
双重封闭机制:
普通蛋白封闭:血清中的白蛋白等成分封闭未包被的疏水区域,类似BSA的作用。
Fc受体封闭:血清内源性IgG可阻断样本中Fc受体与检测抗体之间的非特异性结合。
二、核心特性
特性说明:
种属匹配性:需与二抗来源一致(如二抗为羊抗兔,则应选用羊血清),以避免交叉反应。
成分复杂性:含多种蛋白(如IgG、白蛋白等),提供更全面的封闭效果,但可能引入干扰(如生物素酶系统禁用)。
低毒性:优质血清经过去补体处理,减少对细胞或酶的抑制作用。
三、对比其他封闭剂
与BSA对比:
优势:血清可以封闭Fc受体,适合高Fc受体样本(如组织匀浆)。
劣势:成本较高,成分复杂可能导致背景波动。
与脱脂奶粉对比:
血清不含奶粉中的生物素或磷酸酶,适用于更广泛的检测系统。
四、使用注意事项
浓度优化:常用5%-10%浓度,需通过预实验确定最佳信噪比。
避免干扰:含叠氮钠的血清不可用于HRP标记系统(会抑制酶活性)。冻存血清需避免反复冻融,以防止蛋白降解。
替代方案:对Fc受体敏感的实验可以考虑使用Fab片段作为二抗封闭。
五、典型应用场景
免疫组化/荧光:优先使用同源血清以降低背景噪音。
高Fc受体样本:适用于血液、脾脏组织等的检测。
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